ELISA实验技巧：ELISA（双抗体夹心法）检测HBsAg

以已知抗体(抗HBs)包被载体，然后将含有抗原的待检标本加入，共同孵育后，抗原结合于包被抗体上，再加入酶标记特异抗体(酶标抗HBs)，酶标抗体连接到抗原上，zui后加入底物溶液，根据颜色反应来判定抗原含量。

【材料】HBsAg试剂盒，本试剂盒含：
1、包被抗-HBs反应条
1瓶
2、酶结合物
1瓶
3、HBSAg阳性对照
1瓶
4、HBsAg阴性对照
1瓶
5、洗涤液:用前每瓶作1：20稀释
1瓶
6、显色剂(TMB)A
1瓶
7、显色剂(TMB)B
1瓶
8、终止液
1瓶

【方法】

1、加入待测标本每孔0.05ml，并设HBsAg阳性对照2孔，HBsAg阴性对照2孔，空白对照1孔，然后加入酶结合物每孔1滴(0.05ml、空白对照孔不加)，充分混匀后置37℃孵育30分钟。
2、洗板:弃去反应条孔内液体、拍干、用洗涤液注满每孔，弃去拍干，反复五次后拍干。
3、显色剂:先加显色剂A每孔1滴(0.05ml)，然后再加显色剂B每孔1滴(0.05ml)，混匀，37℃孵育10分钟。
4、每孔加终止液1滴(0.05ml)，混匀。

【结果】

比色法:波长450nm，先用空白孔校零点，然后读取各孔光密度值。
样品OD值/阴性对照平均OD值≥ 2.1判断为阳性，否则为阴性。
备注：阴性对照平均OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。阳性对照OD值≥0.8，实验结果有效。

【注意事项】
1、试剂盒置2℃～8℃保存。
2、使用前试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。
3、从冷藏环境中取出试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔条，置室温平衡30分钟后再行测试，余者应及时封存于冰箱中以备后用。
4、待测标本不可用NaN3防腐。
5、不同批号试剂请勿通用。
6、结果判断须在10分钟内完成。
7、若浓缩洗涤液出现结晶时，请置37℃至溶解。