上海ELISA试剂盒应用中显色、比色问题讲解

在上海ELISA试剂盒实验中各种酶标仪性能都会有所不同，所以在使用中应详细阅读说明书，再进行下一步操作。
自从20世纪60-70年代问世以来，上海ELISA试剂盒法得到*科研工作者的认可及推崇，在欧美及中国获得很大的推广，尤其是国内生化领域的长足发展。ELISA试剂盒有着准确性高、灵敏度高、特异性强等很多的优点，它在检测抗体、抗原等方面有很好的应用，深受广大用户朋友的喜爱。然而，在实验过程中，也需要注意很多问题，特别是显色、比色问题。
显色是上海ELISA试剂盒中的zui后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测定的显色可在室温进行，时间一般不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色适当缩短或延长反应时间，及时判断。
上海ELISA试剂盒OPD（邻苯二胺）底物显色一般在室外温或37℃反应20-30分钟后即不再加深，再延长反应时间，可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色，显色反应应避光进行，显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD产物用硫酸终止后，显色由橙黄色转向棕黄色。
TMB（四甲基联苯胺）受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后，约40分钟显色达，随即逐渐减弱，至2小时后即可*消退至无色。TMB的终止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠（SDS）等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间（12-24小时）不褪，是目视判断的良好终止剂。此外，各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长（450nm）测读吸光值。