单宁含量检测试剂盒说明书

规格：100T/96S

产品内容：

提取液：液体100mL×2瓶，4℃保存。试剂一：粉剂×1瓶，常温保存。

微量法

标准品：粉剂×1支，10mg单宁酸，4℃保存。临用前加入1.175mL提取液溶解为5000nmol/mL的标准液。

产品说明：

单宁又称植物多酚，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。单宁可作为潜在的生物标记物；与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。其收敛性是多种生理活性的基础，如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性，也是影响产品口感的因素之一。

根据光谱特性，单宁在275nm下有较强的紫外吸收，通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。

自备实验用品及仪器：

紫外分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板和蒸馏水。

测定操作：

1、样本处理：

将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.05g，加入1mL提取液，封口膜封口防止液体溅出，于70℃水浴提取30min，期间可摇晃数次。12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至1mL，待测。

2、操作步骤：

（1）紫外分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至275nm。蒸馏水调零。

（2）将5000nmol/mL标准液用提取液稀释为6.25、3.125、1.5625、0.78625、0.4、0.2nmol/mL标准溶液。

（3）加样表：

充分混匀震荡5min，13000g 离心20min。取200µL上清液测定275nm下的吸光度，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算∆A测定=A对照管-A测定管，A标准=A标准管-A空白管。

单宁含量计算：

1、标准曲线的绘制：

以标准溶液的浓度为x轴，以A标准为y轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b，将∆A测定带入方程中得到x（nmol/mL）

2、单宁含量计算：

1. 按蛋白浓度计算：

单宁含量（nmol/mg prot）=x×V提取÷(V提取×Cpr) =x÷Cpr。

2. 按样本鲜重计算：

单 宁 含 量 （nmol/g 鲜 重 ）=x×V 提 取 ÷W =x÷W 。Cpr： 样品蛋白浓度，mg/mL（蛋白浓度需重新用PBS提取测定）；W：样品质量，g；V提取：

提取液体积，2mL。

注意事项：

1、 当∆A大于1.5时，建议将样品上清液用提取液稀释更大倍数后测量；∆A过小时，建议减少稀释倍数或增加样品质量来测定。