Mouse OPN ELISA试剂盒参考数值

Mouse OPN ELISA试剂盒参考数值

1.  检测范围：6.25 ng/mL – 200 ng/mL。

2.  灵敏度：检测浓度小于1.0 ng/mL。

3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠骨桥素（OPN）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠骨桥素（OPN）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值

验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。