催产素检测试剂盒（酶联免疫法）ELISA操作原理

催产素检测试剂盒（酶联免疫法）ELISA操作原理

德国进口DRG

【检测原理】 

在执行此测定之前，请阅读完整的试剂盒说明书。提供催产素标准品以生成测定的标准曲线，所有样品应 从标准曲线中读出。 将标准品或稀释的样品加入到包被有抗体的微孔板中，以捕获兔抗体。将催产素-过氧化物酶联物添加到标 准品和样品的孔中。通过向每个孔中添加催产素多克隆抗体来启动结合反应。在 4°C 孵育过夜后，洗涤微 孔并添加提供的底物。底物与结合的催产素-过氧化物酶结合物反应。孵育 30 分钟后，停止反应，并在能 够测量 450 nm 波长的酶标仪中检测所产生颜色的强度。 使用大多数酶标仪提供的软件对样品的稀释液进行适当校正后，可以计算出样品中催产素的浓度。

所需但未提供的其他材料

1. 蒸馏水或去离子水 2. 聚丙烯或玻璃管 3. Speedvac /离心浓缩器或 N 2气体和瓦斯集合管进行蒸发 4. 带有一次性吸头的移液器，例如 Eppendorf 移液枪，可精确分配 25 µL，50 µL 和 100 µL 5. 微孔板振荡器 6. 450 nm 酶标仪 7. 四参数对数曲线（4PLC）拟合的软件 

【储存条件】 试剂盒在 4°C 下可保存至效期结束。 

【样本类型】 该测定方法已经过血清，EDTA 和肝素血浆，唾液，澄清牛奶和组织培养样品的验证。 使用前，应将含有可见颗粒物的样品离心。

催产素在所有物种中都是相同的，我们希望该试剂盒可以检测人类以外来源的催产素。 由于与鱼神经叶激素和中催产素的交叉反应性，该试剂盒还应能够测量鸟类，鱼类，两栖动物和爬行动物 中的鱼神经叶激素。最终用户应评估其他被测样品中催产素的回收率。

【样品制备】 血清和血浆样本 在试剂盒中检测之前，应使用提供的提取液或固相 C18 柱提取方案（应要求提供肽/蛋白质提取方案）提 取血清和血浆样品。 

使用提取液的方案： 1. 将 1 份样品与 1.5 份提取液混合。

2. 然后在室温下涡旋振荡 90 分钟。

3. 在 4°C 下以 1660 x g 离心 20 分钟。 

4. 将上清液转移到透明管中。 

5. 将上清液在 37℃下干燥浓缩。 

6. 用 250 µL 分析缓冲液复溶样品。

唾液样本 唾液样本应使用血清和血浆样本所述的提取试剂进行提取。唾液应与 Sarstedt 唾液采集管一起收集，提取， 干燥并在 250 µL 的分析缓冲液中重新配制。 

牛奶样本 牛奶样品应通过以 10,000×g 离心 15 分钟来澄清。刺穿顶部脂肪层并收集上清液。重复离心和收集两次。 然后，在用于测定之前，必须使用提供的分析缓冲液将收集的上清液稀释≥1:10。 澄清的牛奶样品，即上清液，可以在-20℃下保存直至需要。

在制备后的 2 小时内使用所有样品

【试剂准备】 使所有试剂平衡至室温 30 分钟。在将其运用于试剂盒之前，请确保所有样品均已达到室温并已适当稀释。 

分析缓冲液 将一份浓缩液添加到四份去离子水中来稀释分析缓冲液浓缩液 1：5。稀释后，可在 4°C 下稳定 3 个月。 洗涤缓冲液 将一部分浓缩液添加到 19 份去离子水中来稀释洗涤缓冲液浓缩液 1:20。稀释后，在室温下稳定 3 个月。

标准品制备 将试管标记为＃1 至＃8。 吸取 450 µL 分析缓冲液至＃1 试管中，然后吸取 300 µL 至其余试管中。 催产素原液包含有机溶剂。将移液器吸头预冲洗几次，以确保准确递送。 小心地将 50 µL 催产素原液加入 1 号试管中，并*涡旋。然后再加入 200 µL 1 号管液至 2 号试管中并完 全涡旋。重复＃3 至＃8 试管的系列稀释。 试管 1 至 8 中催产素的浓度将为 10,000、4,000、1,600、640、256、102.4、40.96 和 16.38 pg / mL。