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豚鼠ELISA试剂盒操作流程和常见问题解答

更新时间:2020-07-27      浏览次数:1519
   豚鼠ELISA试剂盒操作流程和常见问题解答
  豚鼠ELISA试剂盒操作流程如下:
  (1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
  (2)酶标板置4℃,包被过夜。
  (3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
  (4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
  (5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  (6)洗板,同(4)。
  (7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
  (8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  (9)洗板,同(4)。
  (10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
  (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
  (12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
  (13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
  介绍一下豚鼠ELISA试剂盒实验操作的常见问题。
  一、一次ELISA实验需要多长时间?
  双抗体夹心ELISA法一次实验需要3.5-4小时,竞争ELISA法一次实验需要2-2.5小时。
  二、血清样本如何处理?
  全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
  三、血浆样本如何处理?
  建议选择EDTA或者柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,于1000×g离心15分钟,仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
  四、细胞上清液样本如何处理?
  检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(1000×g)。仔细收集上清。
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